亚洲av无码专区在线播放中文 ,无码人妻丰满熟妇区免费,韩国免费A级毛片久久

轉(zhuǎn)自羅氏診斷生命科學公眾號

聚合酶鏈式反應（Polymerase Chain Reaction，PCR）是一種用于放大擴增特定DNA片段的分子生物學技術，其核心就是DNA聚合酶。目前分子生物學領域中很多都是使用野生型的DNA聚合酶，如Taq DNA聚合酶等天然形式存在的酶。野生型的Taq聚合酶由于本身的結(jié)構(gòu)導致功能有限，經(jīng)常會遇到如擴增效率低，特異性差，啟動速度慢，模板GC含量異常等擴增不出的問題。隨著新興技術的發(fā)展，對DNA擴增酶的需求越來越高，能否進行快速擴增、能否有效擴增復雜樣本、能否進行多重擴增成為DNA擴增酶亟待解決的問題。

2018年，來自加州理工學院的Frances H. Arnold教授因為“酶的定向進化”這一領域的貢獻，獲得諾貝爾化學獎。定向進化允許對酶功能進行持續(xù)改進，例如提高熱穩(wěn)定性、比活性、持續(xù)合成能力或?qū)σ种苿┑目剐?。Roche旗下Kapa Biosystems成功利用其定向進化技術（Directed evolution technology platform）設計出KAPA2G快速熱啟動DNA聚合酶。KAPA2G快速熱啟動DNA聚合酶是抗體介導的熱啟動聚合酶，具有更高的擴增性能和速度。其具有1 s/kb的延伸速度，相比于野生型Taq DNA聚合酶1min/kb的擴增速度，能夠極大地縮短總循環(huán)時間。在具有強大的擴增速度下，KAPA2G快速熱啟動DNA聚合酶同時具有相當強大的“耐受”能力，面對粗制樣本、GC異常樣本均具有優(yōu)秀的擴增能力。另外在多重擴增方面也表現(xiàn)優(yōu)秀。針對當前PCR面臨的“快速、穩(wěn)健和多重”的痛點，KAPA2G系列分別能夠提供KAPA2G Fast、KAPA2G Robust和KAPA2G Multiplex三種類型的產(chǎn)品，真正是PCR里的多、快、好、省。

KAPA2G系列產(chǎn)品適合的應用：

多重PCR擴增

法醫(yī)學檢測

多重擴增毛細管電泳檢測

宏基因組測序mNGS

病原靶向測序tNGS

遺傳病多重擴增檢測

“多”重

—KAPA2G Fast HS Multiplex

KAPA2G Fast HS Multiplex試劑盒包含KAPA2G快速熱啟動DNA 聚合酶。除了具有快速擴增速度外，KAPA2G Fast HS Multiplex還能提供更高的產(chǎn)量和靈敏度，與高度多重的PCR。

高通量測序現(xiàn)在已經(jīng)廣泛用于病原微生物和腫瘤檢測，但是不同起始樣本質(zhì)量參差不齊，部分樣本中某些基因豐度太低，直接進行建庫測序可能導致結(jié)果不準確甚至出現(xiàn)漏檢。斯坦福大學的Zhang¹等人利用KAPA2G Fast HS Multiplex進行測序前的預擴增，能夠?qū)颖局邪谢蜇S度提升1000倍左右，有效的提高整體檢測準確性和完整度。另外NGS測序的結(jié)果驗證同樣重要，目前常用的方法是進行RT-PCR驗證，常見的RT-PCR一次只能檢測一到二個基因。Miljani´c²等利用KAPA2G Fast HS Multiplex建立多重RT-PCR技術—mRT-PCR（Multiplex），能夠?qū)y序結(jié)果進行快速高效驗證。病原靶向測序技術是一種新型技術，將超多重PCR擴增與高通量測序兩種技術結(jié)合，可以對待測樣本中幾十種至幾百種的目標基因進行檢測。這種方法的提前就是需要DNA擴增酶具有強大的多重擴增能力。Franken³等利用KAPA2G Fast HS Multiplex的超多重擴增能力，建立了一種基于靶向基因多重擴增高通量測序的方法，用于提高乳腺癌的靶向治療。

圖A：使用KAPA2G Fast Multiplex進行快速多重PCR可以節(jié)省 40 – 60% 的時間。

圖B：使用KAPA2G Fast Multiplex進行GC豐富的多重PCR（6 重）實驗，能夠有效擴增全部目標片段。

數(shù)據(jù)來源：羅氏診斷實驗室整理

? +

KAPA2G Fast Multiplex特點：

節(jié)省時間

預混液無需過多優(yōu)化，對多重PCR體系縮短循環(huán)時間高達60%

強勁多重性能

KAPA2G Fast Multiplex對應對富含GC或AT序列的靶標均具有優(yōu)秀性能，同時對體系中超多重靶標擴增具有優(yōu)秀均一性

“快”速

—KAPA2G Fast

KAPA2G Fast試劑盒是一款旨在解決快速PCR的產(chǎn)品。相比于野生型Taq聚合酶，其有用更高的合成能力和速度。除了超快的擴增速度，KAPA2G Fast還提供能夠具有更高的擴增效率和擴增能力。

圖A：KAPA2G Fast HotStart聚合酶有效擴增5個不同大小的人基因片段，其中延伸時間為1秒/循環(huán)。

圖B：使用野生型Taq DNA聚合酶和KAPA2G Fast DNA聚合酶擴增人基因組DNA (≤3.5 kb) 和lambda (≤5 kb)不同長度片段的總反應時間，反應時間基于試劑盒推薦的35循環(huán)程序。

數(shù)據(jù)來源：羅氏診斷實驗室整理

? +

KAPA2G Fast特點：

節(jié)省寶貴時間

延伸時間可達到1秒/kb，減少PCR反應時間達75%

應對復雜模板

覆蓋高AT和高GC含量的靶標

持續(xù)提升PCR反應的開發(fā)

熱啟動和即用型制式

“好”擴

—KAPA2G Robust

KAPA2G Robust試劑盒通過更高的合成速率和特異性賦予PCR更加強健的表現(xiàn)、更高的靈敏度和更好的常規(guī)反應抑制劑耐受能力。KAPA2G Robust試劑盒適用于復雜困難樣本類型等具有挑戰(zhàn)性的PCR應用，無需在酶類選擇和反應方案層面的過多優(yōu)化。

進行PCR反應過程中是常常會遇到模板異常的情況，比如粗制提取，含有各種PCR抑制物，或者GC豐度異常的樣本，這類型樣本在進行高通量測序時難以直接進行建庫，非常考驗建庫DNA酶擴增能力。TERT（telomerase reverse transcriptase）啟動子突變的檢測是診斷膠質(zhì)母細胞瘤的關鍵因子，然而TERT啟動子的GC含量在80%以上，一般的DNA聚合酶難以進行擴增。Ward⁴等利用KAPA2G Robust對模板高GC的耐受能力，成功擴增TERT啟動子并開展下游的測序工作。

圖A：使用KAPA2G Robust和野生型Taq 聚合酶，在四種常見PCR抑制劑存在的條件成功擴增出從1pg質(zhì)粒DNA擴增1.5kb片段。

圖B：使用KAPA2G Robust對72種不同GC含量的PCR產(chǎn)物進行擴增。

數(shù)據(jù)來源：羅氏實驗室整理

? +

KAPA2G Robust特點：

輕松應對粗提樣本

KAPA2G Robust對抑制劑殘留和粗提樣本PCR有很高的耐受能力（例如FFPE樣本）

在具有挑戰(zhàn)性的應用中實現(xiàn)高靈敏度

每單位酶呈現(xiàn)高得率

提升復雜困難樣本的 PCR 表現(xiàn)

應對富含GC和AT序列的靶標并且減少您的反應優(yōu)化時間

“省”心

—羅氏診斷的品質(zhì)保證

羅氏生命科學部的工業(yè)原料產(chǎn)品作為羅氏產(chǎn)品大家族中的一員，秉承了羅氏公司一貫堅持的高品質(zhì)特性，為各生產(chǎn)企業(yè)、大型研究所、研發(fā)中心等提供上佳的原料來源，包括分子診斷、臨床生化、免疫檢測和生物制藥等各應用領域。除了高品質(zhì)的產(chǎn)品外，提供高水準的產(chǎn)品服務和技術服務也是羅氏診斷致力追求的目標。我們期待著和您攜手共進，贏向未來。

產(chǎn)品	規(guī)格	貨號
KAPA2G Fast HS	12500U	7983239001
KAPA2G Robust Hotstart Ready Mix預混液	12.5mL	08041113001
KAPA2G Fast HS Multiplex預混液	50mL	09077898001

參考文獻：

Zhang R, Li X, Ramaswami G, et al. Quantifying RNA allelic ratios by microfluidic multiplex PCR and sequencing. Nature methods, 2014, 11(1): 51-54.
Miljani? V, Jakše J, Rusjan D, et al. Small RNA Sequencing and Multiplex RT-PCR for Diagnostics of Grapevine Viruses and Virus-like Organisms. Viruses, 2022, 14(5): 921.
Franken A, Rivandi M, Yang L, et al. A multiplex PCR-based next generation sequencing-panel to identify mutations for targeted therapy in breast cancer circulating tumor cells. Applied Sciences, 2020, 10(10): 3364.
Ward D G, Baxter L, Gordon N S, et al. Multiplex PCR and next generation sequencing for the non-invasive detection of bladder cancer. PloS one, 2016, 11(2): e0149756.

*不用于臨床診斷。MC-CN-02503 有效期至2025年11月8日。

END