實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和可重現(xiàn)性,對于科研工作者的重要性是不言而喻的。
在實驗的過程中,有時候明明是相似的實驗過程,卻因為一些失之毫厘的誤差,讓結(jié)果差之千里。
其中很大一部分原因來自于我們幾乎每天都要使用的移液器,“正確使用移液器”聽上去像是每個實驗人員早已學(xué)會的基本操作,但實際上由于移液失誤造成誤差的情況數(shù)不勝數(shù)。
道理很簡單:
那些習(xí)以為常的事物,往往會成為最容易被忽略的疏漏之處!
今天就讓我們回到最初的樣品處理過程,來審視自己是否避開了每一步的陷阱。不論你是移液新手,還是用“槍”大師,都值得收藏這一篇事無巨細(xì)的操作指導(dǎo)!
我們的目標(biāo)是:用好移液器,每天不加班!
組成精準(zhǔn)的移液系統(tǒng)
一,挑選合適的吸頭
吸頭作為實驗室常用的一次性耗材,其重要性常常被忽視。
低質(zhì)量的吸頭不僅會存在殘留污染物到樣品中的風(fēng)險,而且還會影響到移液系統(tǒng)的密封性以及精準(zhǔn)性。反之,高質(zhì)量的吸頭具有光滑無瑕疵及高度的均一性,如此才能保證實驗結(jié)果的重現(xiàn)性。
二,選擇合適量程的移液器
移液器最大量程的30%-100%是推薦適用范圍,在移液時,吸頭內(nèi)的空氣柱體積越小,誤差越低。
假如實驗中需要移取的液體體積為100μL,小E會推薦選擇10-100μL量程的移液器,如下圖所示,雖然不同量程的移液器都可用于移取100μL,但準(zhǔn)確度和精準(zhǔn)度差異會很明顯。
三,刻度調(diào)節(jié)有玄機
在刻度調(diào)節(jié)時,從大量程調(diào)節(jié)至小量程,精度最佳;從小量程調(diào)節(jié)至大量程,最好先調(diào)至略大一點,再返回。
四,移取液體小竅門
01.保證垂直吸液,根據(jù)流體靜力壓原理,移液器斜著吸液將使體積偏大。
02.吸頭盡量浸沒得淺一些,防止液體殘留在吸頭表面;但是同時要浸沒得足夠深,防止吸取空氣,下表是針對不同量程移液器建議的浸沒深度。
03.至少預(yù)潤濕3次,使得空氣柱充滿飽和的液體分子(特別是在移取易揮發(fā)性液體時),可最大限度降低空氣柱帶來的誤差。如下圖所示,在100μL的移液中,第一次和第二次移液體積偏小,3次以上,移液體積越來越接近設(shè)定體積。
04.吸、放液體應(yīng)該緩慢、勻速,以提高移液精準(zhǔn)性。因此推薦大家使用電動移液器,電動馬達(dá)驅(qū)動,減少人為誤差,提高精準(zhǔn)度。
05.吸取液體后稍稍停留一會兒(特別是對于大量程移液器),此處小E溫馨提醒,不用擔(dān)心漏液,好的移液系統(tǒng)是不存在漏液問題的(小E驕傲臉)
五,合適角度打出液體
成功完成精準(zhǔn)移液
放液時注意吸頭尖端靠在容器內(nèi)壁,特別是對于20μL以下的體積尤為重要。
移液器角度為20°~45°,體積低于10μL直接放液到容器底部。
如果按照操作做到了這里,那么恭喜你!這是精準(zhǔn)移液的最后一步,相信用槍高手如你掌握角度一定早已游刃有余,完成這一步,收獲完美結(jié)果!
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