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1儀器：垂直系列電泳槽；低、中、高壓電源；恒溫循環(huán)器
2試劑：丙烯酰胺、甲叉雙丙烯酰胺、過(guò)硫酸銨、TEMED、考馬斯亮藍(lán)硝酸銀、凝膠緩沖液、非變性上樣緩沖液、Tris堿、甘氨酸等
聚丙烯酰胺凝膠電泳
變性聚丙烯酰胺凝膠電泳1儀器：垂直系列電泳槽；低、中壓電源、恒溫循環(huán)器2試劑：丙烯酰胺、N,N’-甲叉雙丙烯酰胺，SDS（十二烷基硫酸鈉）溶液、1.5MTris-HCl(pH8.8）、0.5MTris-HCl(pH6.8）、TEMED、10%(w/v)過(guò)硫酸胺溶液、SDS-Page上樣緩沖液:（0.5M Tris（pH6.8）緩沖液、甘油、10%SDS、二硫蘇糖醇、溴酚藍(lán)）、Tris、甘氨酸、SDS、考馬斯亮藍(lán)硝酸銀等
SDS-Page，在蛋白質(zhì)裂解液中加入SDS和疏基乙醇或DTT
巰基乙醇或DTT可使蛋白質(zhì)分子中二硫鍵還原，使多肽分成單個(gè)亞單位。
PAGE據(jù)其有無(wú)濃縮效應(yīng)，分為連續(xù)系統(tǒng)與不連續(xù)系統(tǒng)
連續(xù)系統(tǒng)電泳體系中緩沖液pH值及凝膠濃度相同，帶電顆粒在電場(chǎng)作用下，主要靠電荷及分子篩效應(yīng)；不連續(xù)系統(tǒng)電泳體系中由于緩沖液離子成分、pH、凝膠濃度及電位梯度的不連續(xù)性，帶電顆粒在電場(chǎng)中泳動(dòng)不僅有電荷效應(yīng)、分子篩效應(yīng)，還具有濃縮效應(yīng)，故分離效果更好。不連續(xù)的聚丙烯酰胺凝膠作為支持介質(zhì)，利用凝膠層的不連續(xù)性、緩沖液離子的不連續(xù)性、PH的不連續(xù)性及電位梯度的不連續(xù)性，使樣品在不連續(xù)的兩相間積聚濃縮成很薄的起始區(qū)帶，然后進(jìn)行分離。
樣品濃縮效應(yīng)
1）凝膠孔徑的不連續(xù)性：濃縮膠為大孔膠；分離膠為小孔膠。在電場(chǎng)作用下，樣品顆粒在大孔膠中泳動(dòng)的阻力小，移動(dòng)速度快；當(dāng)進(jìn)入小孔膠時(shí)，受到的阻力大，移動(dòng)速度減慢。因而在兩層凝膠交界處，樣品遷移受阻而壓縮成很窄的區(qū)帶。
2）電位梯度的不連續(xù)性：電泳開始后，快離子的快速移動(dòng)會(huì)在其后形成一個(gè)離子強(qiáng)度很低的低電導(dǎo)區(qū)，使局部電位梯度增高，將蛋白質(zhì)濃縮成狹窄的區(qū)帶
緩沖體系離子成分及pH值的不連續(xù)性
Tris:緩沖配對(duì)離子，維持溶液的電中性及pH值Cl-:在電場(chǎng)中遷移率快，前導(dǎo)離子(leading ion)，快離子。Gly:其pI=6.0，在pH6.8的濃縮膠緩沖體系中，甘氨酸解離度很小，因而在電場(chǎng)中遷移很慢，稱為尾隨離子（trailing ion），慢離子。當(dāng)進(jìn)入pH8.8的分離膠時(shí)，甘氨酸解離度增加，其有效遷移率超過(guò)蛋白質(zhì);因此Cl-及NH2CH2COO-沿著離子界面繼續(xù)前進(jìn)。高電勢(shì)梯度不存在了，各種蛋白質(zhì)僅會(huì)由于其分子量或構(gòu)型的不同，在一個(gè)均一的電勢(shì)梯度和pH條件下通過(guò)一定孔徑的分離膠時(shí)所受阻滯的程度不同，表現(xiàn)的泳動(dòng)率的不同被分開大多數(shù)蛋白質(zhì)在pH6.7或8.3時(shí)均帶負(fù)電荷，在電場(chǎng)中，都向正極移動(dòng)。
